이전 블로그 게시물에서 우리는 형광 단백질이 바이오 센서,프로세스를 모니터링하거나 분자를 감지하는 생물학적 도구를 구성하는 데 어떻게 사용될 수 있는지에 대해 논의했습니다. 글루타민산염을 검출하기 위하여 디자인된 최근에 격상된 바이오 센서.

글루타민산염은 시냅스 커뮤니케이션에 있는 다양한 역할을 하고 신경원 신호 및 규칙의 그밖 모양을 방아쇠를 당길 수 있습니다.

을 만들 iGluSnFr,the Looger lab 끼 GFP 사이에 두 개의 절반의 bacterially 파생 periplasmic 조미료 바인딩은 단백질로 알려져 있 GltI. 생성 된 융합 단백질이 글루타메이트에 결합 할 때,구조적 변화는 삽입 된 유전자변형에서 형광 강도의 증가로 이어진다.

체외 이글루스피르를 특성화하고,글루타메이트에 의해 선택적으로 활성화되는 것을 보여주고,반응성을 향상시키기 위해 이를 조정한후,루거 연구소는 이글루스피르가 다.엘레 간,제브라 피쉬 및 생쥐에서 신경 세포 활동을 감지 할 수 있음을 보여 주었다.유용한 도구이기는 하지만,이 첫 번째 버전의 이글루스엔프라인은 높은 신호 대 잡음비 또는 고주파 글루타메이트 신호 이벤트의 이미징이 필요한 실험에 최적이 아니었다. 따라서 루거 랩은 여기에 자세히 설명 된 3 가지 주요 방법으로 이글 러스 넨 프에 개선되었습니다. 연구원은 다음을 수행 했다:

  1. 다양한 글루타메이트 결합 동역학을 가진 새로운 이글루스피르 변이체 생성
  2. 청색 및 황색 이글루스피르 변이체 생성

여기에서 이글루스피르 플라스미드를 찾아보세요!

증가 된 밝기

첫 번째 변경에서 마빈 등은 이글 러슨을 생성하기 위해 이글 러슨을 위해 이글 러슨을 교환했다. 이 향상 된 변형 박테리아에서 높은 발현 수준 및 궁극적으로 마우스와 흰 족제비 모델에서 글루타메이트를 감지 시 강한 형광 신호를 생성 합니다.

다양 한 글루타메이트 결합 속도 론

에 대 한 글루타메이트 적정비록 원래의 이글루스인프라멘은 세포 배양에서 글루타메이트에 대 한 생리적으로 관련 된 4 100%친 화성을 했다,이 상대적으로 낮은 수준의 친 화성은 다음 설정에서 성능에 영향을:

  1. 낮은 주파수 신호 검출,증가 된 친 화성 및 높은 신호 대 잡음비
  2. 이산,높은 주파수 이벤트의 식별-이러한 개별 이벤트에서 신호를 식별 하기 위해 낮은 친 화성(빠른 오프 속도 통해)필요

이러한 문제를 극복 하기 위해,마 빈 등 친 화성에 대 한 중요 한 것으로 알려진 융합 단백질의 영역을 돌연변이. 이 소위”힌지 영역”의 돌연변이로 인해 두 가지 유용한 변종이 식별되었습니다:

  • 이글루스글루타메이트에 대한 친 화성 증가
  • 글루타메이트에 대한 친 화성 감소)

마빈 등. 184 의 변이체가 글루타민산염의 낮은 농도에 반응하여 더 강렬한 형광 신호를 생성한다는 것을 또한 보여준다. 다른 한편으로는,전기 자극에 신경원 글루타메이트 방출 같이 반복한 고주파 사건을 검출하기에 더 낫습니다. 이러한 변형을 통해 연구원은 실험 요구에 가장 적합한 특정 도구를 선택할 수 있습니다.녹색-

새로운 색상

원래 색상-녹색. 연구원은 인근 세포에서 별도의 신호 이벤트를 이미지화하거나 특정 세포 유형에서 글루타메이트 신호를 쉽게 식별하기 위해 더 많은 색상이 필요할 수 있습니다. 따라서 마빈 등은 이글루스반 발색단을 이글루스반 발색단에 교환하고,필요한 경우 이글루스반 발색단백질 연계를 최적화하여 청색(이글루스반 발색단백질-아주라이트-이글루스반 발색단백질)과 황색(이글루스반 발색단백질-금성-이글루스반 발색단백질)변이체를 생성하였다. 사실,새로운 색상을 추가하는 것 외에도 노란색 변형은 단일 샘플에서 여러 영역을 자극 할 수있는 저렴한 1030 나노 미터 2 광자 펨토초 레이저로 이미지화 할 수 있습니다. 이러한 김포-이글 러스 프르 구조를 통해 과학자들은 새로운 이글 러스 프르 프르 색상과 그들을 자극하는 새로운 방법을 모두 가지고 있습니다!

연구실에서 김포-이글루스피어를 사용하면 과학자들이 뇌와 그 너머의 신호 사건을 견고하게 탐지할 수 있어야 한다. 그러나,2013 년 연구에서 언급한 바와 같이,글루타메이트 신호 전달은 많은 맥락에서 발생하며 박테리아에서 동물,식물에 이르는 유기체에서 일하는 과학자들에게 유용할 수 있다.

루거 랩은 발기인 시스템에 대한 간단한 분석을 제공하여,:

    • 캐그:일반 강력한 발기인. 신경원 표현을 위한 에이브디제이로 공식화.
    • 카그-플렉스:카그-발현 세포에서의 발현을 위해 굴곡된 카그 프로모터.
    • 시냅:인간 시냅신 -1 촉진제. 신경원 표정을 위해 좋은. 시냅-플렉스:시난신-1 촉진제,크리-발현 세포에서의 발현을 위해 굴곡된다. 10-15 일 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안,이 기간 동안. 신경 세포 표현(뉴런이 아님)에 좋습니다.

우리는 당신이 훌륭한 새로운 도구를 사용하는 방법을 볼 수 기쁘게 생각합니다!

바이러스 벡터 다운로드 101 전자책

1. 마빈,조나단 에스. “글루타메이트 센서의 안정성,친 화성 및 색채 변형.”자연 방법(2018):936-939. 30377363.

여기서 플라스미드를 찾아라!

2. 마빈,조나단 에스. “글루타메이트 신경 전달을 시각화하기위한 최적화 된 형광 프로브.”자연 방법 10.2(2013):162. 23314171. 2018 년 11 월 1 일.1432>

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